昆蟲細胞是多種重組蛋白的多功能表達宿主。其較強的折疊能力和較高的培養(yǎng)密度使其成為表達細胞內(nèi)復(fù)雜蛋白和病毒蛋白的理想選擇。2007年,由昆蟲細胞系以病毒樣顆粒(VLPs)的形式生產(chǎn)的病毒疫苗Cervarix被批準(zhǔn)用于人類。除了在疫苗開發(fā)方面的潛力外,昆蟲細胞產(chǎn)生的高活性蛋白還應(yīng)用于生物物理學(xué)和生物化學(xué)的各個學(xué)科,如結(jié)構(gòu)解釋、藥物設(shè)計、測定方法建立和診斷試劑開發(fā)等等。許多生物廠家利用昆蟲細胞進行重組蛋白產(chǎn)品開發(fā)和承包研究項目。重組蛋白大規(guī)模的瞬時表達是研究熱點。進口bFGF重組蛋白
重組蛋白疫苗是采用基因工程技術(shù),將病毒的目的抗原基因構(gòu)建在表達載體上,將已構(gòu)建的表達蛋白載體轉(zhuǎn)化到細菌、酵母或哺乳動物或昆蟲細胞中,在一定的誘導(dǎo)條件下,表達出大量的抗原蛋白,再經(jīng)提純并添加佐劑而制成疫苗。重組蛋白疫苗主要有三個優(yōu)勢:不養(yǎng)活病毒,無需擔(dān)心病毒外泄,對生產(chǎn)車間的生物安全等級要求低;利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)生產(chǎn)病毒S蛋白上的RBD蛋白,能實現(xiàn)高產(chǎn)量、高純度、低成本;重組蛋白疫苗只含RBD蛋白,純度高,安全性更好。進口bFGF重組蛋白國產(chǎn)重組蛋白品牌有哪些?
重組蛋白的細菌表達系統(tǒng)有各種各樣的載體和宿主菌可供選擇,大部分工程菌的增殖時間短,不僅便于快速評價實驗結(jié)果,而且降低了技術(shù)和設(shè)備無菌要求的嚴(yán)格性。無害大腸桿菌是腸道正常微生物群的一部分與生物體為共生關(guān)系,可以通過產(chǎn)生維生素K 2使機體受益,并防止病原菌在腸道增殖。大腸桿菌是用于重組蛋白生產(chǎn)的宿主菌,它不僅具有遺傳背景清楚、培養(yǎng)操作簡單、轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)導(dǎo)效率高、生長繁殖快、成本低廉,可以快速大規(guī)模地生產(chǎn)目的蛋白等優(yōu)點,而且其表達外源基因產(chǎn)物的水平遠高于其它基因表達系統(tǒng),表達的目的蛋白量甚至能超過細菌總蛋白量的30%,對小分子蛋白的生產(chǎn)具有極大的優(yōu)勢,因此大腸桿菌是目前應(yīng)用多的重組蛋白質(zhì)表達系統(tǒng)。
市場上重組蛋白通常以凍干形式售賣,這是因為蛋白質(zhì)對熱敏感,凍干能使蛋白質(zhì)在存儲過程中保持活性,延長保存時間,同時也能降低運輸成本。但是凍干對蛋白質(zhì)的活性會有一定的影響,可能造成蛋白質(zhì)部分失活、聚集和其它變性等。這個時候,就需要通過加入保護劑(穩(wěn)定劑,添加劑,輔料)和控制凍干的各種條件來盡可能降低這些負面的影響,盡可能的保護蛋白的活性。常見的保護劑或穩(wěn)定劑包括糖類,多元醇,聚合物,表面活性劑,某些蛋白和氨基酸等。高純度、高活性、低內(nèi)毒素,高批次間一致性是選購重組蛋白的重點。
單克隆抗體是一類重組蛋白,不論是科研還是醫(yī)療中,都有很大應(yīng)用。突出的表達重組單克隆抗體的宿主細胞系是CHO、NS0、SP2/0、HEK293和PER.C6。然而,大多數(shù)文獻都是關(guān)于CHO細胞的,該細胞仍然是現(xiàn)今工業(yè)生產(chǎn)重組蛋白藥物的主力,占到了70%(Jayapal等人,2007)。CHO細胞是于1986年一個被批準(zhǔn)的重組生物制藥的表達系統(tǒng)(組織型纖溶酶原actin物;t-PA)。從那時起,CHO細胞就是是重組蛋白表達的選擇。盡管有其他哺乳動物表達系統(tǒng)可用,CHO細胞仍然是優(yōu)化重組蛋白表達研究的中心。重組蛋白的應(yīng)用顯著增長,用于重組蛋白表達和純化的技術(shù)和產(chǎn)品也得以增長。無動物源性BMP-7重組蛋白
多肽類激素藥是重組蛋白藥物中的明星產(chǎn)品。進口bFGF重組蛋白
在科研實驗中,重組蛋白的生物學(xué)活性通常以ED50來表示。在大多數(shù)情況下,研究人員一般基于各類指示性細胞——如某些原代細胞或細胞系——來開展生物分析。常用的生物分析法包括細胞增殖分析,細胞趨化性分析,細胞因子生成分析和細胞毒性分析。通常以ED50來表示某一細胞因子的生物活性,該值表示能夠誘發(fā)50%大效應(yīng)的細胞因子濃度。這一表示效價的方法適用于那些劑量效應(yīng)曲線為S形的細胞因子。ED50被定義為處于max反應(yīng)50%水平的細胞因子濃度。這一表示現(xiàn)效價的方法適用于那些劑量效應(yīng)曲線為S形的細胞因子。將ng/mL單位的ED50活性值(注意:如當(dāng)前為pg/mL,請先換算為ng/mL)轉(zhuǎn)換為(注意:如需當(dāng)前單位為pg/mL,請先換算為ng/mL)單位/毫克(unit/mg)特定活性值的公式為(當(dāng)ED50表示為處于一個范圍區(qū)間時,選擇此范圍的中點值):1 x 10E6/ED50* (ng/mL) = 以單位/毫克(Units/mg蛋白)表示為單位的特定蛋白特定活性。進口bFGF重組蛋白
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