標(biāo)記的多樣化與多功能酶標(biāo)儀應(yīng)運(yùn)而生 標(biāo)記物的多樣化,是免疫技術(shù)的發(fā)展和進(jìn)步的一個(gè)方面。免疫檢測(cè)標(biāo)記物由本初的放射同位素,發(fā)展為安全無污染的辣根過氧化物酶(HRP)和磷酸酯酶,并進(jìn)一步擴(kuò)展到熒光素、稀土元素(目前主要是Eu)、上轉(zhuǎn)換等;底物溶液也對(duì)應(yīng)的由酶催化下產(chǎn)生顏色效應(yīng)的底物發(fā)展為產(chǎn)生光子或熒光信號(hào),獲得更加靈敏和穩(wěn)定的信號(hào)和更寬的線性范圍,并相應(yīng)產(chǎn)生了更多檢測(cè)模式。 多種檢測(cè)模式整合在單臺(tái)儀器上,多功能酶標(biāo)儀就運(yùn)用而生了,可實(shí)現(xiàn)對(duì)吸光度、時(shí)間分辨熒光(TRF)、化學(xué)發(fā)光(Lum)及非標(biāo)記檢測(cè)技術(shù)熒光偏振(FP) 、熒光強(qiáng)度(FI,F(xiàn)RET)等兩種或多種模式的檢測(cè)。此外,應(yīng)用于分子互作的BRET/NANO-BIT(生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù))、熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)(TR-FRET)和ALPHA等,近些年也被應(yīng)用于多功能酶標(biāo)儀中。而且多功能酶標(biāo)儀不限于微孔板檢測(cè),還可內(nèi)置比色皿插槽。因此,酶標(biāo)儀目前已成為一個(gè)廣義的定義。酶標(biāo)儀即酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀。是酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的儀器又稱微孔板檢測(cè)器。上海智能化酶標(biāo)儀使用方法
七、雙波長(zhǎng)評(píng)價(jià) 方法:在運(yùn)用酶標(biāo)儀檢測(cè)樣品時(shí),由于溶液中的小氣泡、杯底的水紋印及劃痕、小孔杯之間透明度的差異等等,這些都是儀器測(cè)定過程中常見的干擾因素,而標(biāo)本中的干擾組份(如溶血、黃道)因洗滌而對(duì)測(cè)定結(jié)果影響則較小,因此我們將文獻(xiàn)中的雙被長(zhǎng)評(píng)價(jià)方法改為:取同一廠、同一批號(hào)酶標(biāo)板條(每個(gè)通道2條共24孔)每孔加入200ul甲基橙溶液(吸光度調(diào)0.065~0.070A)先后于8個(gè)通道分別采用單波長(zhǎng)(490nm)和雙波長(zhǎng)(測(cè)定波長(zhǎng)490nm、參比波長(zhǎng)630/650nm)進(jìn)行檢測(cè),計(jì)算單波長(zhǎng)和雙波長(zhǎng)測(cè)定結(jié)果的均值、離散度,比較各組之間是否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異以考察雙波長(zhǎng)消除干擾因素的效果。上海智能化酶標(biāo)儀使用方法全自動(dòng)酶標(biāo)儀主要由樣品處理系統(tǒng)、酶標(biāo)板處理系統(tǒng)、測(cè)試系統(tǒng)和數(shù)據(jù)分析系統(tǒng)組成。
微孔板是一種經(jīng)事先包埋用于放置待測(cè)樣本的透明塑料板,板上有多排大小均勻一致的小孔,孔內(nèi)都包埋著相應(yīng)的抗原或抗體,微孔板上每個(gè)小孔可盛放零點(diǎn)幾毫升的溶液。 光是電磁波,波長(zhǎng)100nm~400nm稱為紫外光,400nm~780nm之間的光可被人眼觀察到,大于780nm稱為紅外光。人們之所以能夠看到色彩,是因?yàn)楣庹丈涞轿矬w上被物體反射回來。綠色植物之所以是綠色,是因?yàn)橹参镂盏拇蟛糠譃榧t橙光和藍(lán)紫光,但對(duì)綠色不吸收,反射出來,所以植物呈現(xiàn)為綠色。酶標(biāo)儀測(cè)定的原理是在特定波長(zhǎng)下,檢測(cè)被測(cè)物的吸光值。 隨著檢測(cè)方式的發(fā)展,擁有多種檢測(cè)模式的單體臺(tái)式酶標(biāo)儀叫做多功能酶標(biāo)儀,可檢測(cè)吸光度(Abs) 酶標(biāo)儀從原理上可以分為光柵型酶標(biāo)儀和濾光片型酶標(biāo)儀。光柵型酶標(biāo)儀可以截取光源波長(zhǎng)范圍內(nèi)的任意波長(zhǎng),而濾光片型酶標(biāo)儀則根據(jù)選配的濾光片,只能截取特定波長(zhǎng)進(jìn)行檢測(cè)。
上海儀器設(shè)備供應(yīng)商-上海儀器儀表生產(chǎn)商-上海精密儀器制造商-上海穩(wěn)贏機(jī)電設(shè)備有限公司的酶標(biāo)儀:全自動(dòng)酶標(biāo)儀是一種高級(jí)的生物實(shí)驗(yàn)設(shè)備,主要用于進(jìn)行生物酶的定性和定量分析。其主要功能是能夠自動(dòng)讀取酶標(biāo)板上的吸光度,以此判斷樣品的含量、活性、結(jié)構(gòu)等信息。全自動(dòng)酶標(biāo)儀的基本原理:全自動(dòng)酶標(biāo)儀主要由樣品處理系統(tǒng)、酶標(biāo)板處理系統(tǒng)、測(cè)試系統(tǒng)和數(shù)據(jù)分析系統(tǒng)組成。樣品處理系統(tǒng)可以自動(dòng)加樣、混合、分配等操作;酶標(biāo)板處理系統(tǒng)可以自動(dòng)清洗、涂覆、加背景液等操作;測(cè)試系統(tǒng)可以自動(dòng)檢測(cè)樣品的吸光度;數(shù)據(jù)分析系統(tǒng)則可以自動(dòng)計(jì)算、分析樣品的數(shù)據(jù),并生成圖表、報(bào)告等結(jié)果。全自動(dòng)酶標(biāo)儀的數(shù)據(jù)分析系統(tǒng)可以自動(dòng)計(jì)算、分析樣品的數(shù)據(jù),并生成圖表、報(bào)告等結(jié)果。
方法: 一、濾光片波長(zhǎng)精度檢查及其峰值測(cè)定 方法及其衡量的標(biāo)準(zhǔn):用高精度紫外可見分光光度計(jì)(波長(zhǎng)精度±0.3nm)對(duì)不同波長(zhǎng)的濾光片進(jìn)行光譜掃描,檢測(cè)值與標(biāo)定值之差即為濾光片波長(zhǎng)精度,其差值越接近于零且峰值越大表示濾光片的質(zhì)量越好,波長(zhǎng)精度越高。 二、靈敏度和準(zhǔn)確度的監(jiān)測(cè) 方法:①靈敏度:配制6ug/ml重鉻酸鉀(干燥)溶液(0.05mo1/L硫酸溶解),加入200ul重鉻酸鉀溶液于小孔杯中,以0.05mo1/L硫酸溶液作空白,于450nm(參比波長(zhǎng)650nm)測(cè)定,其吸光度應(yīng)≥0.01A。②準(zhǔn)確度:準(zhǔn)確配制:1mmo/L對(duì)硝基苯酚(提純品)水溶液,然后以10mmo1/L氫氧化鈉溶液25倍稀釋之,加入200ul稀釋液于小孔杯中,以10mmo1/LNaOH溶液作空白,于405nm(參比波長(zhǎng)650nm)檢測(cè),其吸光度應(yīng)在0.4A(0.395~0.408A)左右。酶標(biāo)儀通常具有自動(dòng)化操作系統(tǒng),能夠?qū)崿F(xiàn)自動(dòng)加樣、洗滌、檢測(cè)等功能,減少了人為操作的誤差和繁瑣性。江蘇品質(zhì)酶標(biāo)儀原理
酶標(biāo)儀兼容微量檢測(cè)板:可進(jìn)行體積為2μL或4μL,較大可支持60多個(gè)微量樣品的同時(shí)檢測(cè)。上海智能化酶標(biāo)儀使用方法
酶標(biāo)儀的分類 1.光吸收酶標(biāo)儀:是用來進(jìn)行可見光與紫外光吸光度的檢測(cè),特定波長(zhǎng)的光通過微孔板中的樣品后,光能量被吸收,而被吸收的光能量與樣品的濃度呈一定的比例關(guān)系,由此可以用來定性和定量的檢測(cè),光吸收的檢測(cè)技術(shù)成熟,成本低,操作簡(jiǎn)單,但是動(dòng)態(tài)范圍窄,靈敏度比較低,特異性不強(qiáng),一般可見光和紫外光分別采用鎢燈及氘燈作為光源,而紫外/可見酶標(biāo)儀是可以將兩種光源進(jìn)行切換,適應(yīng)不同測(cè)量波長(zhǎng)的需求。 2.熒光酶標(biāo)儀:是用來進(jìn)行熒光的檢測(cè),通過激發(fā)光柵分光后的特定波長(zhǎng)的光照射到被熒光物質(zhì)標(biāo)定的樣品上后,會(huì)發(fā)出波長(zhǎng)更長(zhǎng)的發(fā)射光,通過發(fā)射光柵后到達(dá)檢測(cè)器,熒光的強(qiáng)度與樣品的濃度呈一定的比例,熒光檢測(cè)靈敏度高,可實(shí)時(shí)檢測(cè),使用方便,檢測(cè)模式多樣,但是容易受外界干擾,激發(fā)光與發(fā)射光容易互相影響,干擾檢測(cè)。上海智能化酶標(biāo)儀使用方法