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血清是指血液凝固后,在血漿中除去纖維蛋白分離出的淡黃色透明液體或指纖維蛋白已被除去的血漿。其主要作用是提供基本營養(yǎng)物質(zhì)、提供各種生長因子、提供結(jié)合蛋白、提供促接觸和伸展因子使細(xì)胞貼壁免受機(jī)械損傷、對(duì)培養(yǎng)中的細(xì)胞起到某些保護(hù)作用。血清的主要成分:血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物,其組成成份雖大部分已知,但還有一部分尚不清楚,且血清組成及含量常隨供血?jiǎng)游锏男詣e、年齡、生理?xiàng)l件和營養(yǎng)條件不同而異(胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛;新牛血清取自出生24小時(shí)之內(nèi)的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。顯然,胎牛血清是品質(zhì)比較高的,因?yàn)樘ヅ_€未接觸外界,血清中所含的抗體、補(bǔ)體等對(duì)細(xì)胞有害的成分比較少)。細(xì)胞培養(yǎng)時(shí),要保證細(xì)胞可以順利生長和增殖,需添加10%~20%的血清,動(dòng)物血清還可起到酸堿度緩沖液的作用。鄭州胎牛血清廠家直銷
組份與比例不同胎牛血清和新生牛血清兩者所含的促細(xì)胞生長因子、促貼附因子、及其他活性物質(zhì)等組份與比例不同。03用途與用法不同某些細(xì)胞必需胎牛血清才能生長,而有些細(xì)胞只需小牛血清即可,使用濃度不同,一般在5%-10%,有特殊要求的濃度在20%。血清保存和使用須注意:血清應(yīng)保存在-5℃至-20℃,若存放在4℃不可超過一個(gè)月。解凍血清時(shí),應(yīng)先將血清至于2-8℃冰箱,并經(jīng)常搖勻使之溶解,然后至室溫放置使之升溫,一定不可將冷凍的血清直接放入37℃水浴或者溫箱中,如放在37℃解凍,顏色加深,粘稠度也會(huì)增加,血清在解凍和熱滅活后,應(yīng)按用量分裝并于-20℃保存,避免反復(fù)凍融。天津豬血清培養(yǎng)基提供結(jié)合蛋白,能識(shí)別維生素、脂類、金屬等,能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。
血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、無機(jī)物等,這些物質(zhì)對(duì)促進(jìn)細(xì)胞生長或抑制生長活性是達(dá)到生理平衡的。對(duì)血清的成分和作用的研究雖有很大進(jìn)展,但仍存在一些問題,主要是:一、血清的成份可能有幾百種之多,目前對(duì)其準(zhǔn)確的成份、含量及其作用機(jī)制仍不清楚,尤其是對(duì)其中一些多肽類生長因子、和脂類等尚未充分認(rèn)識(shí),這給研究工作帶來許多困難;二、血清都是批量生產(chǎn),各批量之間差異很大,而且血清保存期至多一年,因此,要保證每批血清的相似性極為困難,從而使實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)化和連續(xù)性受到限制;三、不能排除血清中含有易變物質(zhì),這被認(rèn)為是“瓶中惡化”的原因之一。
顏色不同血清根據(jù)血紅蛋白含量的不同,表現(xiàn)的顏色也不一樣真正的胎牛血清凝血功能差,紅細(xì)胞容易破裂,一般表現(xiàn)出微紅色或橘紅色;而新生牛(小牛)血清則表現(xiàn)為蠟黃色或偏黃色澄清度和粘稠度不同胎牛血清蛋白和脂類含量低,表現(xiàn)為稀薄、清淡新生牛(小牛)血清相比更加粘稠7.血清選擇在這幾類血清中,胎牛血清的品質(zhì)無疑是比較高的,如果你的細(xì)胞比較嬌貴難養(yǎng),出現(xiàn)比較好的培養(yǎng)效果請(qǐng)選擇胎牛血清;如果你的細(xì)胞比較易養(yǎng),給點(diǎn)什么血清都能出現(xiàn)很好的效果,使用新生牛(小牛)血清就足夠了。血清中供給了適量且份額適中的各式各樣的激從來確保動(dòng)物細(xì)胞離體后的正常代謝。
將血清從冷凍箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室溫下使之全融。但必須注意的是,融解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。如果在37℃或更高的溫度解凍血清,血清中會(huì)出現(xiàn)沉淀。此沉淀可能包括磷酸鈣結(jié)晶,但不改變血清的性能,同樣血清熱滅活也會(huì)導(dǎo)致沉淀的形成。渾濁和沉淀所有的血清可能保留一些纖維蛋白原。某些外部因素可能引發(fā)纖維蛋白原轉(zhuǎn)變?yōu)槔w維蛋白,導(dǎo)致血清解凍后可能會(huì)觀察到絮狀物或混濁。這些物質(zhì)的存在不會(huì)改變血清的性能。如果想去除這些絮狀沉淀物,可以將血清分裝到無菌離心管中,以低速離心1~2min,上清液即可直接加入到培養(yǎng)基內(nèi)使用。注意:不要以過濾的方式去除這些絮狀沉淀物,因?yàn)檫@可能阻塞濾膜。富含一些可供貼壁細(xì)胞型細(xì)胞貼壁生長的基質(zhì)成分。溫州豬血清批發(fā)商
血清分離質(zhì)量的好壞,直接影響到監(jiān)測結(jié)果,所以掌握畜禽的采集血分離血清的方法尤為重要。鄭州胎牛血清廠家直銷
抗血清的采集與保存家兔是很常用以產(chǎn)生抗體的動(dòng)物,因此這里主要討論兔血的收集。羊等較大動(dòng)物以頸靜脈、動(dòng)脈取血,鼠等小動(dòng)物取血可參閱有關(guān)資料。取兔血有兩種方法,一是耳緣靜脈或耳動(dòng)脈放血,一是頸動(dòng)脈入血,也可心臟采集血。取動(dòng)脈或靜脈放血時(shí),將免放入一個(gè)特造的木匣或籠內(nèi),耳露于箱(籠) 外,也可由另一人捉住兔身。剪去耳緣的毛,用少許二甲苯涂抹耳廓,30s后,耳血管擴(kuò)張、充血。用手輕拉耳尖,以單面剃須刀或尖的手術(shù)刀片,快速切開動(dòng)脈或靜脈,血液即流出,每次可收集30~40ml。然后用棉球壓迫止血,凝血后洗去二甲苯。二星期后,可在另一耳放血。此法可反復(fù)多次放血。頸動(dòng)脈放血時(shí),將免仰臥,固定于兔臺(tái),剪去頸部的毛,切開皮膚,暴露頸動(dòng)脈,插管,放血。放血過程中要嚴(yán)格按無菌要求進(jìn)行。收集的血液置于室溫下1h左右,凝固后,置4°C下,過夜 (切勿冰凍) 析出血清,離心,4000rpm,10min。在無菌條件,吸出血清,分裝 (0.05~0.2ml) ,貯于-40°C以下冰箱,或凍干后貯存于4。C冰箱保存。鄭州胎牛血清廠家直銷
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