酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價的滴定（見酶標(biāo)記抗體部份）。然后再固定其它條件或采取“方陣法”（包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度）在正式實驗系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng)，而本身無色。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致疾病作用，應(yīng)注意防護(hù)。有條件者應(yīng)使用不致疾病、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后，應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時間，以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入。良好的ELISA試劑盒板應(yīng)該是吸附性能好，空白值低，孔底透明度高，各板之間、同一板各孔之見性能相近。動物ELISA試劑盒
ELISA試劑盒測定方法具有很高的敏感度（pg-ng/ml水平），并且重復(fù)性好。以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的高效催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗技術(shù)。在 ELISA試劑盒 中一般有兩次抗原抗體反響，即加標(biāo)本和加酶結(jié)合物后。抗原抗體反響的完結(jié)需求有一定的溫度和時刻，這一保溫進(jìn)程稱為溫育，有人稱之為孵育，在ELISA試劑盒中似不恰當(dāng)。ELISA屬固相免疫測定，抗原、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)生。以抗體包被的夾心法為例，加入板孔中的標(biāo)本，其間的抗原并不是都有平等的和固相抗結(jié)合的時機(jī)。動物ELISA試劑盒ELISA試劑盒保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。
ELISA試劑盒具有以下幾個優(yōu)點：吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相載體；穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性；靈敏、特異的抗體；節(jié)約實驗經(jīng)費(fèi)；適用血清、血漿、組織勻漿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標(biāo)本類型；LISA試劑盒在的實際使用中，通過不同的規(guī)劃，具體的辦法過程可有多種。如雙抗體夾心法、間接法、競爭法、雙位點一步法、捕獲法測IgM抗體、使用親和素和生物素的ELISA。ELISA試劑盒以免疫學(xué)反應(yīng)為根底，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的催化效果相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗技術(shù)。
ELISA試劑盒底物作用一段時間后，應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時間，10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入。進(jìn)口分裝：檢測范圍和靈敏度不同，用量少時，可使用分裝，前期是它的長久性不是很好。試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)曲線較高點OD 值均在2.0±0.2，零孔的OD 值都控制在0.10以下。試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)R≥0.98。試劑盒重復(fù)性好，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均<9 %。試劑的組份都多給20%的富余量，確保完成48/96孔的檢測，避免分次檢測可能造成試劑量不足的情況。ELISA試劑盒從冰箱中取出的試驗用試劑應(yīng)待溫度與室溫平衡后使用。
ELISA試劑盒已普遍應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗的各領(lǐng)域中。ELISA檢測試劑盒適用于體外定性檢測人血清或血漿中的抗人類戊型肝炎（HEV）病毒 IgM 抗體ELISA檢測。免疫測定技術(shù)的基礎(chǔ)在于抗原抗體之間的特異結(jié)合反應(yīng)，所以任何高品質(zhì)的診斷試劑離不開高品質(zhì)的原料，如抗原抗體，酶等。以前用于免疫測定的抗原通常為各種純化抗原，而抗體則為純化抗原免疫動物后獲得的多克隆抗體和使用雜交瘤技術(shù)得到的單克隆抗體，而抗原或抗體的標(biāo)記物如酶標(biāo)結(jié)合物則通過各種化學(xué)合成方法制備。ELISA試劑盒在同一實驗條件下進(jìn)行反應(yīng)，觀察其顯色反應(yīng)是否均一性。動物ELISA試劑盒
ELISA檢測試劑盒是較容易造假的試劑，因?qū)嶒灪唵巍⒁淮涡詫嶒灥忍攸c而決定。動物ELISA試劑盒
大部分ELISA 檢測均以血清為標(biāo)本。血清標(biāo)本可按常規(guī)方法采集，應(yīng)注意避免溶血，紅細(xì)胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì)，以HRP 為標(biāo)記的ELISA 測定中，溶血標(biāo)本可能會增加非特異性顯色。血清標(biāo)本宜在新鮮時檢測。如有細(xì)菌污染，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP，也會產(chǎn)生假陽性反應(yīng)。一般說來，在5 天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可放置于4℃，標(biāo)本在冰箱中保存時間過長導(dǎo)致血清IgG 聚合，使間接法的試劑本底加深。超過一周測定的需－20℃保存。凍結(jié)血清融解后，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應(yīng)充分混勻并避免產(chǎn)生氣泡?；鞚峄蛴谐恋淼难鍢?biāo)本應(yīng)先離心或過濾，澄清后再檢測。反復(fù)凍融會使抗體效價跌落，所以測抗體的血清標(biāo)本如需保存作多次檢測，宜少量分裝冰存。動物ELISA試劑盒
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